Tripsinizatsiya - bu oqsillarni parchalaydigan proteolitik ferment bo'lgan tripsin yordamida hujayraning dissotsiatsiya jarayoni bo'lib, yopishgan hujayralarni ular yetishtirilayotgan idishdan ajratish uchun. Hujayra kulturasiga qo'shilsa, tripsin hujayralarni tomirga yopishib olish imkonini beruvchi oqsillarni parchalaydi.
Nega biz hujayralarni tripsizizatsiya qilamiz?
Tripsizizatsiya koʻpincha hujayralarni yangi idishga oʻtishga ruxsat berish, tajriba uchun kuzatish yoki kolbadagi qoʻshilish darajasini pasaytirish uchun amalga oshiriladi. hujayralar.
Tripsin hujayralarni ajratish uchun qanday ishlaydi?
Tripsin/EDTA - hujayralarni ajratishning kombinatsiyalangan usuli. Tripsin, agar yuqori oqimdagi aminokislotalarprolin bo'lmasa, C-terminalidagi lizin yoki aginindagi adezyon oqsillarining aminokislotalarini kesish orqali hujayra-hujayra va hujayra-matritsa o'zaro ta'sirida adezyon oqsillarini kesadi.
Tripsinlangan yopishgan hujayralarni qanday olish mumkin?
Protsedura
- Aspiratsiya yoʻli bilan oʻrta idishdan olib tashlang va mono qatlamni Ca2+ va Mg dan xoli tuz eritmasi bilan yuving. Sarumning barcha izlarini olib tashlash uchun 2+. …
- Hujayralarning monoqatlamini toʻliq qoplash uchun kultura idish(lar)iga yetarlicha tripsin yoki tripsin/EDTA eritmasini toʻkib tashlang va ~2 daqiqa davomida 37 °C inkubatorga joylashtiring.
Hujayra madaniyatida tripsinni qanday oʻchirib qoʻyish mumkin?
Yacheykalar ajratilgandan keyin 2 jild qo'shing tripsinni faolsizlantirish uchun oldindan qizdirilgan to'liq o'sish muhiti. >95% hujayraning tiklanishini ta'minlash uchun hujayra qatlami yuzasiga bir necha marta pipetka yordamida muhitni muloyimlik bilan tarqating. Sarumsiz kulturalar uchun, soya tripsin inhibitori (Mahsulot №
