Molekulyar og'irlik qanchalik katta bo'lsa, bobin shunchalik uzun bo'ladi va molekula sekinroq harakat qiladi. Demak, elektroforez + SDS nativ zaryadga qarab emas, molekulyar og'irligiga qarab ajratiladi. Muhim eslatma: bir xil uzunlikdagi oqsillarni odatda gel elektroforezi + SDS bilan ajratib bo'lmaydi.
Bir xil molekulyar ogʻirlikdagi oqsillarni qanday ajratish mumkin?
Sentrifugalash, elektroforez va xromatografiya oqsillarni tozalash va tahlil qilishning eng keng tarqalgan usullaridir. Santrifüjlash oqsillarni ularning massasi va shakli ta'sir qiladigan cho'kindilanish tezligiga qarab ajratadi.
Qanday usullarda oqsillar zaryadga qarab ajratiladi?
Oqsillarni aniq zaryadiga qarab ion almashinadigan xromatografiya orqali ajratish mumkin. Agar oqsil pH 7 da aniq musbat zaryadga ega bo'lsa, u odatda karboksilat guruhlari bo'lgan boncuklar ustuniga bog'lanadi, manfiy zaryadlangan oqsil esa bog'lanmaydi (4.4-rasm).
Quyidagi usullardan qaysi biri oqsillarni molekulyar ogʻirligiga qarab ajratish uchun eng mos keladi?
Boʻlimga asoslangan xromatografiya usullari ajratish va kichik molekulalarni aminokislotalar, uglevodlar va yogʻ kislotalari sifatida aniqlashda juda samarali. Biroq, yaqinlik xromatografiyalari (ya'ni, ion almashinadigan xromatografiya) nuklein kislotalar va oqsillar sifatida makromolekulalarni ajratishda samaraliroqdir.
Qaysi turdagi ustunxromatografiya oqsillarni molekulyar og'irligiga qarab ajratadi?
Gel filtrlash (GF) xromatografiyasi oqsillarni faqat molekulyar hajmiga qarab ajratadi. Ajratish g'ovakli matritsa yordamida amalga oshiriladi, unga molekulalar sterik sabablarga ko'ra turli darajadagi kirish imkoniyatiga ega - ya'ni kichikroq molekulalar ko'proq kirish huquqiga ega va kattaroq molekulalar matritsadan chiqarib tashlanadi.
