Birinchi navbatda, EcoR1 ham, Xba1 ham DNKni hazm qilganda 5' o'simtalar qoldiradi (Nde1 kabi). Ikkala holatda ham 3' uchi chuqurlashtirilgan, shuning uchun poliermaza asoslarni qo'shishi mumkin. Ikkinchidan, barcha polimerazalar faqat 3' uchiga asoslar qo'shishi mumkin, shuning uchun Klenow to'mtoq uchlarini hosil qilish uchun har ikki uchastkaning 3' chetiga 4 ta asos qo'shadi.
Cheklash fermentlari 5 fosfat qoldiradimi?
Restriktor fermentlari tomonidan hazm qilingan vektorlar va qoʻshimchalar kerakli terminal modifikatsiyalarini (5' fosfat va 3' gidroksil) oʻz ichiga oladi, Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) tomonidan yaratilgan fragmentlar esa bunday boʻlmasligi mumkin.
Toʻmtoq uchlarini bogʻlash mumkinmi?
Toʻmtoq uchini bogʻlash
Toʻmtoq uchini bogʻlash choʻzilgan uchlarning tayanch juftlanishini oʻz ichiga olmaydi, shuning uchun har qanday toʻmtoq uchi boshqa toʻmtoq uchga bogʻlanishi mumkin. To'mtoq uchlari SmaI va EcoRV kabi cheklovchi fermentlar tomonidan hosil bo'lishi mumkin.
Taq polimeraza uchlari to'mtoq hosil qiladimi?
Ha… Agar siz PCR da 72 dC da yakuniy uzaytirish bosqichini saqlasangiz, Taq Polimeraza A-Overishlarni qo'shadi. Asosan TA klonlash uchun ishlatiladi.
Nega DNK ketma-ketligida Klenow fragmentidan foydalanish kerak?
Klenow fragmenti tadqiqotga asoslangan vazifalar uchun juda foydali, masalan: Bir zanjirli shablonlardan ikki ipli DNK sintezi . 5' o'simtani to'mtoq qilish uchun DNK bo'laklarining 3' chekka uchlarini to'ldirish . Hazm qilinmoqda 3 dyuymli chiqib ketish.
