Hujayralar ajratilgandan keyin tripsinni inaktivatsiya qilish uchun 2 hajmli oldindan qizdirilgan toʻliq oʻsish muhiti qoʻshing. >95% hujayraning tiklanishini taʼminlash uchun hujayra qatlami yuzasiga bir necha marta pipetka yordamida vositani muloyimlik bilan tarqating.
Tripsin faolligini qanday to'xtataman?
Tripsinning hazm boʻlishini muzlatish yoki chumoli, sirka yoki trifloroatsetik kislota qoʻshib reaksiyaning pH qiymatini pH 4 dan pastga tushirish orqali toʻxtatish mumkin (tripsin faolligi qayta tiklanadi. pH darajasi pH 4 dan yuqori bo'ladi). Hazm qilingan namunalar -20°C da saqlanishi mumkin.
Tripsinni nima zararsizlantiradi?
Bufer tarkibida k altsiy va magniy ionlari ham tripsin faolligini sekinlashtiradi. FBS tripsin faolligini inhibe qilishning samarali usuli hisoblanadi.
Sarum tripsinni faolsizlantiradimi?
Sarum buyraklarning fermentativ hazm boʻlishidan qolgan qoldiq tripsinni va keyinchalik hujayralar tomonidan sintez qilingan proteolitik fermentlarni faolsizlantiradi. Yangi tripsinlangan hujayralar qon zardobisiz mono qatlamlarga o'sishi mumkin, agar ular tripsin qoldiqlarini olib tashlash uchun qayta-qayta yuvilgan bo'lsa.
Tripsinni faolsizlantirish uchun qancha media kerak?
Siz kamida 1:1 nisbatda 5-10% sarum oʻz ichiga tripsin bilan oʻz ichiga olgan vositadan foydalansangiz, etarli darajada inhibisyon boʻlishi kerak, keyin esa sentrifuga qilinadi. va yangi vosita bilan oʻrtacha almashinuv.
